형질전환 실험 |
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| 작성자 | 김유민 | 등록일 | 21.04.12 | 조회수 | 462 |
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목적: 형질전환 세균의 배양 및
준비물: LB배지 가루, 증류수, 삼각플라스크, 전자레인지, 랩, 엠피실린, 형질전환세균 PGLO, Ara, 일회용 백금이, 스프레더, 약숟가락, ...
과정 1. LB배지를 제작한다. ( 1. 삼각 플라스크에 증류수 100mL와 LB 배지 가루 4g을 넣는다. 2. 랩을 씌워 전자레인지를 이용하여 용액이 투명해 질 때까지 가열한다. 3. 페트리 접시에 부은 뒤 상온에서 식힌다.) 2. 대조군과 실험군을 지정한 뒤, (대조군: 아무것도 바르지 않은 LB배지, 실험군A: Ara와 Amp를 둘 다 바른 배지, 실험군B: Amp만 바른 배지) 스프레더를 이용하여 두 용질을 바른다. 이때 너무 한 쪽만 몰리지 않도록 유의한다. 또한 실험군 A의 경우 엠피실린을 먼저 바른 뒤 마를 떄까지 기다린다. 그 후 Ara를 도포한다. 3. PGLO를 백금이를 이용하여 사선 모양으로 바른다. 4. 뚜껑을 닫고 뒤집어 보관한다. 5. 37도의 배양기에 넣은 뒤 24시간 관찰한다.
※ 실험군을 두개로 설정하는 이유- 형질전환 세균인 PGLO는 Amp 저항성이 있음, 고로 도포시, PGLO 제외 나머지 불필요 세균은 사라진다. 또한 PGLO에는 조작으로 인해 GFP가 포함되어 있음으로 형광을 발현하는 물질인 Amp를 추가로 발라주어야 형광 발현 유무를 확인 할 수 있다..
결과: |
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