ptc란?

상염색체에 있는 한 쌍의 대립유전자에 의해 결정되며, PTC 용액의 쓴맛을 느끼는 유전자 가 우성형질(T)이고 쓴맛을 느끼지 못하는 미맹 유전자는 열성형질(t)이다. PTC 미맹의 유전은 멘델의 유전법칙을 따르며, 유전자형은 TT, Tt, tt로 구성된다. 이중 유전자형이 TT, Tt인 사람은 PTC 용액의 쓴맛을 느낄 수 있으나, 유전자형이 tt인 사람은 PTC 용액의 쓴맛을 느낄 수 없는 PTC 미맹이 된다. 

결과

이번 실험에서 2명의 학생이 있는데 1번 학생은 파란색을 제외한 앞에 2개의 DNA이고 2번 학생은 바로 뒤에 2개의 DNA인데 1번학생의 경우 177 & 44 bp가 나왔다. 이는 2개의 유전자 모두 우성 유전자 TT라는 것을 알수 있었다. 그리고 전기영동말고도 맛을 보면 쓴맛이 나는 종이가 있었는데 1번 학생은 쓴맛이 매우 강하게 왔다고 한다. 그리고 2번 학생의 경우 221bp가 나왔는데 이는 2개의 유전자 모두 열성 유전자 tt 라는 것을 알수 있었다. 2번 학생또한 종이를 맛봤는데 1번학생과 다르게 쓴맛이 나지 않았다고 했다.

실험 과정

1) 구강세포 추출

1. 1.5ml Screw-cap 튜브와 식염수컵에 자신의 이름을 표시함.

2. 10mL 식염수를 사용하여 60 초 동안 입을 세게 헹군 후 다시 컵에 뱉음. 

3. 입을 헹군 식염수가 들어있는 컵을 부드럽게 회전시킨 후 식염수 1ml을 1.5ml Screw-cap 튜브에 넣음.

4. 최고 속도로 2분 동안 원심분리하여 세포를 펠릿 화합니다. 상층 액(세포 펠릿 위의 액체)을 따르되 세포 펠릿이 떨어지지 않도록 조심함. 

5. 3~4를 2번 더 반복합니다. 만약 펠릿이 보이지 않으면 펠렛이 보일 때 까지 반복합니다.

6. 펠릿이 들어있는 1.5ml Screw-cap 튜브에 150µL 용해 완충액(Lysis Buffer)을 넣고 위아래로 피펫팅 하거나 볼텍싱하여 펠릿을 완전히 현탁함.

7. 55℃ 항온수조에서 5분간 배양함.

8. 손가락으로 튜브를 20초동안 쳐서 내용물을 충분히 혼합함. 

9. Screw-cap 튜브의 뚜껑을 단단히 조인 후 99℃ 항온수조에서 5분간 배양함.

10. 최고 속도로 2분 동안 원심 분리함

11. 50µL의 상층액을 새로운 1.5ml 튜브로 옮긴 다음 얼음에 박아 둠. 

2) pcr

1. Module I에서 만든 DNA 샘플을 준비함.

2. 0.2ml PCR 튜브에 자신의 이름을 표시함.

3. 40µL PTC 프라이머 믹스(노란색), 10µL DNA(빨간색) 및 PCR EdvoBead ™ PLUS를 0.2ml PCR 튜브에 넣음.

4. 0.2ml PCR 튜브를 흔들거나 손가락으로 쳐서 내용물을 잘 혼합함.

5. 10초 동안 원심분리하여 튜브의 혼합물을 스핀다운 시킴.

6. PCR기를 사용하여 샘플 DNA를 증폭시킴.

7. PCR을 마친 튜브는 얼음에 박아 둠. 

3) 전기영동

1. 젤 트레이를 전기영동기 챔버에 넣고 1X TBE 버프를 아가로즈 젤이 잠기도록 부어줌.

2. Table 1을 가이드로 사용하여 25µL의 샘플을 순서로 웰에 로드함. 

3. 전극을 잘 맞추어 전기영동기 뚜겅을 덮어줌.

4. 전원을 연결하고 Table C를 참고하여 전기영동을 실시함.